Javascript ကို လက်ရှိတွင် သင့်ဘရောက်ဆာတွင် ပိတ်ထားသည်။javascript ကိုပိတ်ထားသောအခါ၊ ဤဝဘ်ဆိုဒ်၏လုပ်ဆောင်ချက်အချို့ အလုပ်မလုပ်ပါ။
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez သိပ္ပံဌာန, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spain * ဤစာရေးဆရာများသည် ဤအလုပ်အတွက် ထိုးထွင်းသိမြင်မှုအချို့ရှိသည် ပံ့ပိုးမှုနောက်ခံ- Hyaluronic acid (HA) သည် အလှအပဆိုင်ရာရည်ရွယ်ချက်များအတွက် အရေပြားအဖြည့်ခံများထုတ်လုပ်ရာတွင် အသုံးပြုသည့် သဘာဝအတိုင်းဖြစ်ပေါ်နေသော polysaccharide ဖြစ်သည်။လူ့တစ်ရှူးများတွင် ရက်အတော်ကြာ တစ်ဝက်သက်တမ်းရှိသောကြောင့် HA-based dermal fillers များသည် ခန္ဓာကိုယ်အတွင်း ၎င်းတို့၏သက်တမ်းကို သက်တမ်းတိုးရန် ဓာတုဗေဒနည်းဖြင့် ပြုပြင်ထားပါသည်။စီးပွားဖြစ် HA အခြေပြုဖြည့်စွက်စာများတွင် အသုံးအများဆုံး ပြုပြင်မွမ်းမံမှုမှာ HA ကွင်းဆက်များကို ချိတ်ဆက်ရန် crosslinking agent အဖြစ် 1.4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) ကို အသုံးပြုခြင်းဖြစ်သည်။ကျန်ရှိသော သို့မဟုတ် ဓာတ်မတည့်သော BDDE ကို သန်းတစ်သန်းလျှင် <2 အစိတ်အပိုင်း (ppm);ထို့ကြောင့်၊ လူနာဘေးကင်းစေရန်အတွက် နောက်ဆုံး dermal filler တွင် ကျန်ရှိသော BDDE ကို အရေအတွက် တိုင်းတာရပါမည်။ပစ္စည်းများနှင့် နည်းလမ်းများ- ဤလေ့လာမှုသည် အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry (LC-MS) တို့ ပေါင်းစပ်ခြင်းဖြင့် BDDE နှင့် HA အကြား အပြန်အလှန်ဆက်စပ်နေသော တုံ့ပြန်မှု၏ ရလဒ်တစ်ခု၏ လက္ခဏာရပ်ကို ဖော်ပြသည်။ရလဒ်များ- ကွဲပြားသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများပြီးနောက်၊ HA-BDDE ဟိုက်ဒရိုဂျယ်ကို ပိုးသတ်ရန်အသုံးပြုသည့် အယ်ကာလိုင်းအခြေအနေများနှင့် မြင့်မားသောအပူချိန်သည် ဤထုတ်ကုန်အသစ်ဖြစ်သည့် "propylene glycol-like" ဒြပ်ပေါင်း၏ဖွဲ့စည်းခြင်းကို အားပေးကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုမှ ထုတ်ကုန်တွင် BDDE ကဲ့သို့ monoisotopic ဒြပ်ထု၊ ကွဲပြားခြားနားသော ထိန်းသိမ်းချိန် (tR) နှင့် မတူညီသော UV စုပ်ယူမှု (λ=200 nm) မုဒ်ရှိကြောင်း အတည်ပြုခဲ့သည်။BDDE နှင့်မတူဘဲ၊ တူညီသောတိုင်းတာမှုအခြေအနေများအောက်တွင်၊ ဤရလဒ်သည် 200 nm တွင်ပိုမိုမြင့်မားသောထောက်လှမ်းမှုနှုန်းရှိကြောင်း LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင်တွေ့ရှိခဲ့သည်။နိဂုံး- ဤရလဒ်များသည် ဤဒြပ်ပေါင်းအသစ်၏ဖွဲ့စည်းပုံတွင် epoxide မရှိကြောင်း ညွှန်ပြသည်။စီးပွားဖြစ်ရည်ရွယ်ချက်အတွက် HA-BDDE ဟိုက်ဒရိုဂျယ် (HA dermal filler) ထုတ်လုပ်မှုတွင် တွေ့ရှိရသည့် ဤအကျိုးဆက်အသစ်၏ အန္တရာယ်ကို အကဲဖြတ်ရန် ဆွေးနွေးမှုကို ဖွင့်ထားသည်။သော့ချက်စာလုံးများ- hyaluronic acid၊ HA dermal filler၊ cross-linked hyaluronic acid၊ BDDE၊ LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၊ BDDE မှထွက်ကုန်။
hyaluronic acid (HA) ကိုအခြေခံထားသော အားဖြည့်ပစ္စည်းများသည် အလှကုန်အတွက်အသုံးပြုသော အသုံးအများဆုံးနှင့် လူကြိုက်များသော အရေပြားဖြည့်ဆေးများဖြစ်သည်။1 ဤအရေပြားဖြည့်စွက်စာသည် အများအားဖြင့် ရေ > 95% နှင့် 0.5-3% HA တို့ပါဝင်ပြီး ဂျယ်လ်ကဲ့သို့ဖွဲ့စည်းပုံကိုပေးသည်။2 HA သည် polysaccharide နှင့် ကျောရိုးရှိသတ္တဝါများ၏ extracellular matrix ၏အဓိကအစိတ်အပိုင်းဖြစ်သည်။ပါဝင်ပစ္စည်းများထဲမှတစ်ခု။၎င်းတွင် (1,4)-glucuronic acid-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) glycosidic bonds များဖြင့် ချိတ်ဆက်ထားသော ထပ်ခါတလဲလဲ disaccharide ယူနစ်များ ပါဝင်သည်။ဤ disaccharide ပုံစံသည် သက်ရှိအားလုံးတွင် တူညီသည်။ပရိုတိန်းအခြေခံဖြည့်စွက်စာအချို့ (ကော်လာဂျင်ကဲ့သို့) နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက၊ ဤပိုင်ဆိုင်မှုသည် HA သည် အလွန်လိုက်ဖက်သောဇီဝဆိုင်ရာမော်လီကျူးတစ်ခုဖြစ်စေသည်။ဤဖြည့်စွက်စာများသည် လူနာ၏ ကိုယ်ခံအားစနစ်မှ အသိအမှတ်ပြုခံရနိုင်သည့် အမိုင်နိုအက်ဆစ် အမျိုးအစားအလိုက် တိကျမှုကို ပြသနိုင်သည်။
အရေပြားဖြည့်စွက်စာအဖြစ်အသုံးပြုသောအခါ၊ HA ၏အဓိကကန့်သတ်ချက်မှာ hyaluronidases ဟုခေါ်သောအင်ဇိုင်းမိသားစုတစ်ခုရှိခြင်းကြောင့် တစ်ရှူးများအတွင်း လျင်မြန်စွာလည်ပတ်မှုဖြစ်သည်။ယခုအချိန်အထိ တစ်ရှူးများတွင် HA ၏ တစ်ဝက်သက်တမ်းကို တိုးမြင့်လာစေရန်အတွက် HA ဖွဲ့စည်းပုံရှိ ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ ပြုပြင်မွမ်းမံမှုများစွာကို ဖော်ပြထားပါသည်။3 ဤမွမ်းမံမှုအများစုသည် polysaccharide ပိုလီမာများသို့ hyaluronidase ၏ဝင်ရောက်မှုကို လျှော့ချရန် HA ကြိုးများကို ချိတ်ဆက်ပေးသည်။ထို့ကြောင့်၊ တံတားများဖွဲ့စည်းခြင်းနှင့် HA ဖွဲ့စည်းတည်ဆောက်ပုံနှင့် ချိတ်ဆက်ထားသော အေးဂျင့်ကြားရှိ intermolecular covalent ချည်နှောင်မှုများကြောင့်၊ ချိတ်ဆက်ထားသော HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်သည် သဘာဝ HA ထက် အင်ဇိုင်းများ ပျက်စီးယိုယွင်းမှု ဆန့်ကျင်ပစ္စည်းများ ပိုမိုထုတ်လုပ်သည်။၄-၆
ယခုအချိန်အထိ၊ လင့်ခ်ချိတ်ထားသော HA ကိုထုတ်လုပ်ရန်အသုံးပြုသည့် ဓာတုအချိတ်အဆက်ရှိသောအေးဂျင့်များတွင် methacrylamide၊ 7 hydrazide၊ 8 carbodiimide၊ 9 divinyl sulfone၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) နှင့် poly(ethylene glycol) diglycidyl ether တို့ ပါဝင်သည်။10 ၊11 BDDE သည် လက်ရှိတွင် အသုံးအများဆုံး crosslinking agent ဖြစ်သည်။ဤဟိုက်ဒရိုဂျယ်အမျိုးအစားများသည် ဘေးကင်းကြောင်း ဆယ်စုနှစ်များစွာကြာ သက်သေပြထားသော်လည်း၊ အသုံးပြုထားသော crosslinking အေးဂျင့်များသည် cytotoxic ဖြစ်နိုင်သည့် ဓာတ်ပြုပစ္စည်းများဖြစ်ပြီး အချို့ကိစ္စများတွင်မူ ဗီဇပြောင်းလဲနိုင်သည်။12 ထို့ကြောင့်၊ နောက်ဆုံး ဟိုက်ဒရိုဂျယ်လ်တွင် ၎င်းတို့၏ကျန်ရှိသော ပါဝင်မှုသည် မြင့်မားနေရပါမည်။ကျန်ရှိသောအာရုံစူးစိုက်မှုသည် တစ်သန်းလျှင် 2 အစိတ်အပိုင်း (ppm) ထက်နည်းသောအခါ BDDE ကို ဘေးကင်းသည်ဟု ယူဆပါသည်။၄
အကြွင်းအကျန်နည်းသော BDDE အာရုံစူးစိုက်မှု၊ HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်များတွင် ကူးလူးဆက်စပ်နေသော ဒီဂရီနှင့် အစားထိုးအနေအထားကို ရှာဖွေရန် နည်းလမ်းများစွာ ရှိပါသည်။ ဥပမာ - ဓာတ်ငွေ့ ခရိုမာတိုဂရမ်၊ အရွယ်အစား ဖယ်ထုတ်ထားသော ခရိုမာတီရိုဂရမ် (MS)၊ နျူကလီးယားသံလိုက်ပဲ့တင်ရိုက်ခတ်မှု (NMR) မီးချောင်းတိုင်းတာခြင်းနည်းလမ်းများ၊ Diode array သည် မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်အရည်အချင်း chromatography (HPLC) နှင့်တွဲထားသည်။13-17 ဤလေ့လာမှုသည် BDDE နှင့် HA ၏ အယ်ကာလိုင်းအခြေအနေများအောက်တွင် ရှိသော BDDE နှင့် HA ၏တုံ့ပြန်မှုမှ ထုတ်ပေးသော နောက်ဆုံး အပြန်အလှန်ချိတ်ဆက်ထားသော HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်၏ ထုတ်ကုန်တစ်ခု၏ လက္ခဏာရပ်ကို ရှာဖွေတွေ့ရှိခြင်းနှင့် လက္ခဏာရပ်များကို ဖော်ပြသည်။HPLC နှင့် liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS analysis)။BDDE ၏ ဤအကျိုးဆက်၏ အဆိပ်အတောက်ကို မသိရသေးသောကြောင့်၊ ၎င်း၏ အကြွင်းအကျန်ပမာဏကို နောက်ဆုံးထုတ်ကုန်ရှိ BDDE တွင် လုပ်ဆောင်လေ့ရှိသည့် နည်းလမ်းနှင့် ဆင်တူသည့်ပုံစံဖြင့် ဆုံးဖြတ်သင့်ကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့ အကြံပြုအပ်ပါသည်။
HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) မှရရှိသော ဆိုဒီယမ်ဆားတွင် မော်လီကျူးအလေးချိန် ~1,368,000 Da (Laurent method) 18 နှင့် ပင်ကိုယ်ပျစ်ဆိန် 2.20 m3/kg ဖြစ်သည်။အပြန်အလှန်ချိတ်ဆက်မှုတုံ့ပြန်မှုအတွက်၊ BDDE (≥95%) ကို Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA) မှ ဝယ်ယူခဲ့သည်။pH 7.4 ရှိသော ဖော့စဖိတ်ဆားရည်ကို Sigma-Aldrich ကုမ္ပဏီမှ ဝယ်ယူခဲ့သည်။LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် အသုံးပြုသည့် ပျော်ရည်များ၊ acetonitrile နှင့် ရေအားလုံးကို HPLC အဆင့်အရည်အသွေးမှ ဝယ်ယူခဲ့သည်။ဖော်မစ်အက်ဆစ် (98%) ကို ဓါတ်ဆေးအဆင့်အဖြစ် ဝယ်ယူသည်။
စမ်းသပ်မှုအားလုံးကို UPLC Acquity စနစ် (Waters, Milford, MA, USA) တွင် လုပ်ဆောင်ခဲ့ပြီး electrospray ionization ရင်းမြစ် (AB SCIEX, Framingham, MA, USA) တပ်ဆင်ထားသော API 3000 triple quadrupole mass spectrometer နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသည်။
ချိတ်ဆက်ထားသော HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်များ၏ ပေါင်းစပ်မှုကို 1% အယ်လကာလီ (ဆိုဒီယမ်ဟိုက်ဒရောဆိုဒ်၊ NaOH) တွင် 10% (w/w) sodium hyaluronate (NaHA) ဖြေရှင်းချက်သို့ BDDE 198 mg ပေါင်းထည့်ခြင်းဖြင့် စတင်ခဲ့သည်။တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောတွင် နောက်ဆုံး BDDE အာရုံစူးစိုက်မှုသည် 9.9 mg/mL (0.049 mM) ဖြစ်သည်။ထို့နောက် တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောကို နှိုက်နှိုက်ချွတ်ချွတ် ရောစပ်ပြီး တစ်သားတည်းဖြစ်တည်ကာ 45°C တွင် 4 နာရီကြာ ဆက်လက်လုပ်ဆောင်ခွင့်ပြုပါ။19 တုံ့ပြန်မှု၏ pH ကို ~ 12 တွင်ထိန်းသိမ်းထားသည်။
ထို့နောက် တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောကို ရေဖြင့်ဆေးကြောပြီး နောက်ဆုံး HA-BDDE ဟိုက်ဒရိုဂျယ်ကို စစ်ထုတ်ကာ PBS ကြားခံဖြင့် HA ပြင်းအား 10 မှ 25 mg/mL နှင့် နောက်ဆုံး pH 7.4 ရရှိရန်။ထုတ်လုပ်ထားသော cross-linked HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်များကို ပိုးသတ်ရန်အတွက်၊ ဤဟိုက်ဒရိုဂျယ်များအားလုံးကို autoclaved (120°C မိနစ် 20 ခန့်) ပြုလုပ်ထားသည်။သန့်စင်ထားသော BDDE-HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်ကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာသည့်အချိန်အထိ 4°C တွင် သိမ်းဆည်းထားသည်။
ချိတ်ဆက်ထားသော HA ထုတ်ကုန်တွင်ပါရှိသော BDDE ကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်၊ 240 မီလီဂရမ်နမူနာကို အလယ်အပေါက် (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; ထုထည် 0.5 mL) နှင့် အခန်းအပူချိန်တွင် 10,000 rpm တွင် centrifuged ၁၀ မိနစ်။စုစုပေါင်း ဆွဲချအရည် ၂၀ µL ကို စုဆောင်းပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။
အယ်ကာလိုင်းအခြေအနေများ (1%, 0.1% နှင့် 0.01% NaOH) အောက်တွင် BDDE စံ (Sigma-Aldrich Co) ကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် အောက်ပါအခြေအနေများနှင့်ကိုက်ညီပါက အရည်နမူနာသည် 1:10၊ 1:100 သို့မဟုတ် အထိ၊ 1:1,000,000 လိုအပ်ပါက၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် MilliQ deionized water ကို အသုံးပြုပါ။
အပြန်အလှန်ချိတ်ဆက်ခြင်းတုံ့ပြန်မှုတွင်အသုံးပြုသည့်စတင်ပစ္စည်းများ (HA 2%, H2O, 1% NaOH, နှင့် 0.049 mM BDDE)၊ အဆိုပါပစ္စည်းများမှပြင်ဆင်ထားသောနမူနာတစ်ခုစီ၏ 1 mL ကို တူညီသောခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအခြေအနေများကိုအသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။
အိုင်းယွန်းမြေပုံတွင် ပေါ်နေသည့် တောင်ထွတ်များ၏ တိကျမှုကို ဆုံးဖြတ်ရန်၊ 100 ppb BDDE စံဖြေရှင်းချက် (Sigma-Aldrich Co) ၏ 10 µL ကို 20 µL နမူနာသို့ ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။ဤကိစ္စတွင်၊ နမူနာတစ်ခုစီရှိ စံ၏နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသည် 37 ppb ဖြစ်သည်။
ပထမဦးစွာ၊ ပုံမှန် BDDE (Sigma-Aldrich Co) ၏ 10 μL ကို 990 μL MilliQ ရေ (သိပ်သည်းဆ 1.1 g/mL) ဖြင့် ဖျော်စပ်ခြင်းဖြင့် 11,000 mg/L (11,000 ppm) ပါဝင်သော BDDE စတော့ရှယ်ယာဖြေရှင်းချက်ကို ပြင်ဆင်ပါ။အလယ်အလတ်စံဖြန်းမှုအဖြစ် 110 µg/L (110 ppb) BDDE ဖြေရှင်းချက်ကို ပြင်ဆင်ရန် ဤဖြေရှင်းချက်ကို အသုံးပြုပါ။ထို့နောက်၊ 75၊ 50၊ 25၊ 10 နှင့် 1 ppb ၏ 75၊ 50၊ 25၊ 10 နှင့် 1 ppb ကိုရရှိရန် အလယ်အလတ် diluent ကို အကြိမ်များစွာ ရောမွှေခြင်းဖြင့် စံမျဉ်းကွေးကို ပြင်ဆင်ရန် အလယ်အလတ် BDDE စံနှုန်းကို အသုံးပြုပါ။ပုံ 1 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း BDDE စံမျဉ်းကွေးသည် 1.1 မှ 110 ppb တွင် linearity (R2>0.99) ကောင်းမွန်သည်ကို တွေ့ရှိရသည်။စံမျဉ်းကွေးကို အမှီအခိုကင်းသော စမ်းသပ်မှုလေးခုတွင် ထပ်ခါတလဲလဲ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။
LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုမှရရှိသော BDDE စံသတ်မှတ်ချက်မျဉ်းကွေး (R2>0.99)။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry
အပြန်အလှန်ချိတ်ဆက်ထားသော HA နှင့် အခြေခံဖြေရှင်းချက်ရှိ BDDE စံနှုန်းများတွင်ပါရှိသော BDDE စံနှုန်းများကို ခွဲခြားသတ်မှတ်ပြီး အရေအတွက်သတ်မှတ်ရန်အတွက် LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို အသုံးပြုခဲ့သည်။
chromatographic ခွဲခြားမှုကို LUNA 2.5 µm C18(2)-HST ကော်လံ (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) တွင် အောင်မြင်ပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွင်း အခန်းအပူချိန် (25°C) တွင် ထားရှိခဲ့သည်။မိုဘိုင်းအဆင့်တွင် acetonitrile (solvent A) နှင့် ရေ (solvent B) သည် 0.1% ဖော်မ့်အက်ဆစ် ပါဝင်ပါသည်။မိုဘိုင်းအဆင့်ကို gradient elution ဖြင့် ဖယ်ထုတ်သည်။gradient သည် အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်- 0 မိနစ်၊ 2% A;1 မိနစ် 2% A;6 မိနစ် 98% A;7 မိနစ် 98% A;7.1 မိနစ် 2% A;10 မိနစ် , 2% A. လည်ပတ်ချိန်သည် 10 မိနစ်ဖြစ်ပြီး ဆေးထိုးသည့်ပမာဏမှာ 20 µL ဖြစ်သည်။BDDE ၏ ထိန်းသိမ်းထားချိန်သည် 3.48 မိနစ်ခန့် (စမ်းသပ်မှုများအပေါ်အခြေခံ၍ 3.43 မှ 4.14 မိနစ်အထိ) ဖြစ်သည်။LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် မိုဘိုင်းအဆင့်ကို စီးဆင်းမှုနှုန်း 0.25 mL/min ဖြင့် စုပ်ယူထားသည်။
MS မှ BDDE ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် ပမာဏအတွက်၊ UPLC စနစ် (Waters) ကို electrospray ionization အရင်းအမြစ်တစ်ခုပါရှိသော API 3000 triple quadrupole mass spectrometer (AB SCIEX) နှင့် ပေါင်းစပ်ထားပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို positive ion mode (ESI+) တွင် လုပ်ဆောင်ပါသည်။
BDDE တွင်ပြုလုပ်ခဲ့သော အိုင်းယွန်းအပိုင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအရ၊ အမြင့်ဆုံးပြင်းထန်မှုရှိသောအပိုင်းအစသည် 129.1 Da (ပုံ 6) နှင့် သက်ဆိုင်သောအပိုင်းတစ်ခုအဖြစ် သတ်မှတ်ခဲ့သည်။ထို့ကြောင့်၊ ပမာဏအတွက် multi-ion monitoring mode (MIM) တွင် BDDE ၏ ထုထည်ပြောင်းလဲခြင်း (mass-to-charge ratio [m/z]) သည် 203.3/129.1 Da ဖြစ်သည်။၎င်းသည် LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် full scan (FS) မုဒ်နှင့် ထုတ်ကုန်အိုင်းယွန်းစကင်န် (PIS) မုဒ်ကိုလည်း အသုံးပြုသည်။
နည်းလမ်း၏ တိကျမှုကို အတည်ပြုရန်အတွက် ဗလာနမူနာ (အစပိုင်း မိုဘိုင်းအဆင့်) ကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။203.3/129.1 Da ၏အစုလိုက်အပြုံလိုက်ပြောင်းလဲခြင်းနှင့်အတူ ဗလာနမူနာတွင် မည်သည့်အချက်ပြမှုကိုမျှ ရှာမတွေ့ပါ။စမ်းသပ်မှု၏ ထပ်တလဲလဲဖြစ်နိုင်မှုနှင့်ပတ်သက်၍၊ 55 ppb (စံကိုက်ညှိမျဉ်းကွေး၏အလယ်တွင်) စံထိုးဆေး 10 ခုကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့ပြီး ကျန်ရှိသောစံသွေဖည်မှု (RSD) <5% (ဒေတာမပြပါ)။
ကျန်ရှိသော BDDE ပါဝင်မှုကို သီးခြားလွတ်လပ်သော စမ်းသပ်မှုလေးခုနှင့် သက်ဆိုင်သော BDDE ဖြတ်ကျော်ချိတ်ဆက်ထားသော HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ် ရှစ်မျိုးဖြင့် တွက်ချက်ထားသည်။“ပစ္စည်းများနှင့် နည်းလမ်းများ” ကဏ္ဍတွင် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ ပမာဏကို BDDE စံနှုန်းလျော့ချမှု၏ ပျမ်းမျှတန်ဖိုး၏ ဆုတ်ယုတ်မှုမျဉ်းကွေး၏ ပျမ်းမျှတန်ဖိုးဖြင့် အကဲဖြတ်ပြီး BDDE အစုလိုက်အပြုံလိုက် 203.3/129.1 Da ၏ အကူးအပြောင်းတွင် တွေ့ရှိခဲ့သည့် ထူးခြားသောအထွတ်အထိပ်နှင့် ကိုက်ညီသော၊ အချိန် 3.43 မှ 4.14 မိနစ် စောင့်ဆိုင်းမနေပါ။ပုံ 2 သည် 10 ppb BDDE ရည်ညွှန်းစံနှုန်း၏ chromatogram တစ်ခုကို ပြသထားသည်။ဇယား 1 သည် မတူညီသော ဟိုက်ဒရိုဂျယ်ရှစ်မျိုး၏ ကျန်ရှိသော BDDE ပါဝင်မှုကို အကျဉ်းချုပ်ဖော်ပြထားသည်။တန်ဖိုးအပိုင်းအခြားသည် 1 မှ 2.46 ppb ဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ နမူနာတွင်ကျန်ရှိသော BDDE အာရုံစူးစိုက်မှုသည် လူသားအသုံးပြုမှုအတွက် လက်ခံနိုင်သည် (<2 ppm)။
ပုံ 2 ၏ 10 ppb BDDE ရည်ညွှန်းစံ (Sigma-Aldrich Co)၊ LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုမှရရှိသော 203.30/129.10 Da (အပြုသဘောဆောင်သော MRM မုဒ်တွင်) ၏ MS (m/z) အကူးအပြောင်း။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊MRM၊ မျိုးစုံသော တုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း၊MS, အစုလိုက်အပြုံလိုက်;m/z၊ ထုထည်မှ အားသွင်းအချိုး။
မှတ်ချက်- နမူနာ 1-8 များသည် autoclaved BDDE ဖြတ်ကျော်ချိတ်ဆက်ထားသော HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်များဖြစ်သည်။ဟိုက်ဒရိုဂျယ်တွင် ကျန်ရှိသော BDDE ပမာဏနှင့် BDDE ထိန်းထားချိန်၏ အထွတ်အထိပ်ကိုလည်း အစီရင်ခံပါသည်။နောက်ဆုံးတွင် မတူညီသော ထိန်းသိမ်းထားချိန်များဖြင့် အမြင့်ဆုံးတောင်တန်းအသစ်များ တည်ရှိနေကြောင်းကိုလည်း အစီရင်ခံပါသည်။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic အက်ဆစ်;MRM၊ မျိုးစုံသော တုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း၊tR၊ ထိန်းသိမ်းချိန်၊LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊RRT၊ ဆွေမျိုးထိန်းသိမ်းချိန်။
အံ့သြစရာကောင်းသည်မှာ၊ LC-MS ion chromatogram ၏ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုသည် autoclaved cross-linked HA hydrogel နမူနာများကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအပေါ်အခြေခံ၍ 2.73 မှ 3.29 မိနစ်အထိတိုတောင်းသောထိန်းသိမ်းထားချိန်၌အပိုအထွတ်အထိပ်တစ်ခုရှိသည်ကိုပြသခဲ့သည်။ဥပမာအားဖြင့်၊ ပုံ 3 သည် ချိတ်ဆက်ထားသော HA နမူနာတစ်ခု၏ အိုင်းယွန်းခရိုမာတိုဂရမ်ကို ပြသသည်၊ ၎င်းသည် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် မတူညီသော ထိန်းသိမ်းချိန် ၂.၇၁ မိနစ်တွင် ထပ်လောင်းအထွတ်အထိပ်တစ်ခုပေါ်လာသည်။အသစ်တွေ့ရှိထားသော အထွတ်အထိပ်နှင့် BDDE မှ အထွတ်အထိပ်ကြားတွင် တွေ့ရှိရသော နှိုင်းရထိန်းသိမ်းချိန် (RRT) ကို 0.79 (ဇယား 1) တွင် တွေ့ရှိခဲ့သည်။LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် အသုံးပြုသည့် C18 ကော်လံတွင် အသစ်တွေ့ရှိရသော အထွတ်အထိပ်သည် လျော့နည်းကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့သိထားသောကြောင့်၊ အထွတ်အထိပ်အသစ်သည် BDDE ထက် ပိုလာဒြပ်ပေါင်းတစ်ခုနှင့် ဆက်စပ်နိုင်ပါသည်။
ပုံ 3 LC-MS (MRM အစုလိုက်အပြုံလိုက်ပြောင်းလဲခြင်း 203.3/129.0 Da) မှရရှိသော cross-linked HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်နမူနာ၏ Ion chromatogram။
အတိုကောက်များ- HA၊ hyaluronic acid;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊MRM၊ မျိုးစုံသော တုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း၊RRT၊ ဆွေမျိုးထိန်းသိမ်းချိန်၊tR၊ ထိန်းသိမ်းချိန်။
တွေ့ရှိရသော အထွတ်အထိပ်အသစ်များသည် အသုံးပြုထားသောကုန်ကြမ်းများတွင် မူလရှိနေသော ညစ်ညမ်းမှုများ ဖြစ်နိုင်ချေကို ဖယ်ရှားရန်အတွက် အဆိုပါကုန်ကြမ်းများကို တူညီသော LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနည်းကို အသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့ပါသည်။ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော စတင်ပစ္စည်းများတွင် ရေ၊ ရေတွင် 2% NaHA၊ ရေတွင် 1% NaOH နှင့် BDDE တို့သည် အပြန်အလှန်ချိတ်ဆက်ခြင်းတုံ့ပြန်မှုတွင် အသုံးပြုသည့် တူညီသောအာရုံစူးစိုက်မှုတွင် ပါဝင်ပါသည်။စတင်အသုံးပြုသည့်ပစ္စည်း၏ ion chromatogram သည် မည်သည့်ဒြပ်ပေါင်း သို့မဟုတ် အထွတ်အထိပ်ကိုမျှ မပြသဘဲ၊ ၎င်း၏ ထိန်းသိမ်းထားချိန်သည် တွေ့ရှိရသော အမြင့်ဆုံးအသစ်နှင့် ကိုက်ညီပါသည်။ဤအချက်သည် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုလုပ်ငန်းစဉ်တွင် အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေနိုင်သော ဒြပ်ပေါင်းများ သို့မဟုတ် ဒြပ်ပေါင်းများပါ၀င်သည်သာမက အခြားဓာတ်ခွဲခန်းထုတ်ကုန်များတွင်ပါ ညစ်ညမ်းစေနိုင်သော လက္ခဏာမပြကြောင်း ဤအချက်က ဖယ်ရှားထားသည်။BDDE ၏ LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာပြီးနောက် ရရှိသော အာရုံစူးစိုက်မှုတန်ဖိုးများကို ဇယား 2 (နမူနာ 1-4) နှင့် ပုံ 4 ရှိ အိုင်းယွန်းခရိုမာတိုဂရမ်တွင် ပြထားသည်။
မှတ်ချက်- နမူနာ 1-4 သည် autoclaved BDDE cross-linked HA hydrogels ထုတ်လုပ်ရန် အသုံးပြုသည့် ကုန်ကြမ်းများနှင့် ကိုက်ညီပါသည်။ဤနမူနာများသည် autoclaved မဟုတ်ပါ။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic အက်ဆစ်;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊MRM၊ မျိုးစုံတုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း။
ပုံ 4 သည် HA နှင့် BDDE ၏ အပြန်အလှန်ချိတ်ဆက်မှုတုံ့ပြန်မှုတွင် အသုံးပြုသည့် ကုန်ကြမ်းနမူနာတစ်ခု၏ LC-MS ခရိုမာတိုဂရမ်နှင့် ကိုက်ညီသည်။
မှတ်ချက်- ၎င်းတို့အားလုံးကို ချိတ်ဆက်ခြင်းတုံ့ပြန်မှုကို လုပ်ဆောင်ရန် အသုံးပြုသည့် တူညီသော အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် အချိုးအစားဖြင့် တိုင်းတာသည်။chromatogram ဖြင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာသော ကုန်ကြမ်းများအတွက် နံပါတ်များသည်- (1) ရေ၊ (2) 2% HA ရေပျော်ရည်၊ (3) 1% NaOH aqueous solution တို့ဖြစ်သည်။LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို 203.30/129.10 Da (အပြုသဘောဆောင်သော MRM မုဒ်တွင်) အစုလိုက်အပြုံလိုက်ပြောင်းလဲခြင်းအတွက် လုပ်ဆောင်သည်။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic အက်ဆစ်;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊MRM၊ မျိုးစုံတုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း။
တောင်ထိပ်အသစ်များ ဖြစ်ပေါ်လာစေသည့် အခြေအနေများကို လေ့လာခဲ့သည်။ချိတ်ဆက်ထားသော HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်ကို ထုတ်လုပ်ရန် အသုံးပြုသည့် တုံ့ပြန်မှုအခြေအနေများသည် BDDE ချိတ်ဆက်ခြင်း အေးဂျင့်၏ ဓာတ်ပြုမှုကို အကျိုးသက်ရောက်စေကာ အထွတ်အထိပ်အသစ်များ (ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော ထုတ်ကုန်များ) ဖြစ်ပေါ်လာစေရန်အတွက် အမျိုးမျိုးသော တိုင်းတာမှုများ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ဤဆုံးဖြတ်ချက်များတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ကွဲပြားသောပါဝင်မှုရှိသော NaOH (0%, 1%, 0.1%, 0.01%) ဖြင့် ကုသထားသော နောက်ဆုံး BDDE crosslinker ကို လေ့လာပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာကာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာကာ ရေခံတွင်းတစ်ခုတွင် သို့မဟုတ် autoclaving ပြုလုပ်ထားသည်။တူညီသောအခြေအနေများကို အတုယူရန် ဘက်တီးရီးယားလုပ်ထုံးလုပ်နည်းသည် ချိတ်ဆက်ထားသော HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်ထုတ်လုပ်ရန်အသုံးပြုသည့်နည်းလမ်းနှင့် အတူတူပင်ဖြစ်ပါသည်။“ပစ္စည်းများနှင့် နည်းလမ်းများ” ကဏ္ဍတွင် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း နမူနာ၏ အစုလိုက်အပြုံလိုက် ကူးပြောင်းမှုကို LC-MS မှ 203.30/129.10 Da သို့ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။BDDE နှင့် အထွတ်အထိပ်အသစ်၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကို တွက်ချက်ပြီး ရလဒ်များကို ဇယား 3 တွင် ပြထားသည်။ အဖြေလွှာတွင် NaOH ပါဝင်မှု မည်သို့ပင်ရှိစေကာမူ autoclaved မရှိသော နမူနာများတွင် အထွတ်အထိပ်အသစ်များကို တွေ့ရှိခြင်းမရှိပါ (နမူနာ 1-4၊ ဇယား၊ ၃)။autoclaved နမူနာများအတွက်၊ အထွတ်အထိပ်အသစ်များကို ဖြေရှင်းချက်တွင် NaOH ၏ရှေ့မှောက်တွင်သာ တွေ့ရှိနိုင်ပြီး အထွတ်အထိပ်ဖွဲ့စည်းမှုသည် ဖြေရှင်းချက်ရှိ NaOH အာရုံစူးစိုက်မှုအပေါ် မူတည်ပုံရသည် (နမူနာ 5-8၊ ဇယား 3) (RRT = 0.79)။ပုံ 5 တွင် NAOH ရှိနေခြင်း သို့မဟုတ် မရှိခြင်းတွင် အော်တိုကေးရှင်းနမူနာနှစ်ခုကို ပြသထားသော အိုင်းယွန်းခရိုမာတိုဂရမ်တစ်ခု၏ ဥပမာကို ပြသည်။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊MRM၊ မျိုးစုံတုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း။
မှတ်ချက်- ထိပ်တန်း ခရိုမာတိုဂရမ်- နမူနာအား 0.1% NaOH aqueous solution ဖြင့် ကုသပြီး autoclaved (120°C မိနစ် 20)။အောက်ခြေခရိုမာတိုဂရမ်- နမူနာကို NaOH ဖြင့် မကုသသော်လည်း တူညီသောအခြေအနေများအောက်တွင် autoclaved ပြုလုပ်ထားသည်။203.30/129.10 Da (အပြုသဘောဆောင်သော MRM မုဒ်တွင်) ၏အစုလိုက်အပြုံလိုက်ပြောင်းလဲခြင်းကို LC-MS မှခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊MRM၊ မျိုးစုံတုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း။
NaOH ပါသော သို့မဟုတ် မရှိသော autoclaved နမူနာများအားလုံးတွင် BDDE အာရုံစူးစိုက်မှု အလွန်လျော့ကျသွားသည် (16.6 ကြိမ်အထိ) (နမူနာ 5-8၊ ဇယား 2)။BDDE အာရုံစူးစိုက်မှု ကျဆင်းခြင်းသည် မြင့်မားသော အပူချိန်တွင် ရေသည် 1,2-diol ဒြပ်ပေါင်းအဖြစ် BDDE ၏ epoxide ring ကိုဖွင့်ရန် အခြေခံ (nucleophile) အဖြစ် လုပ်ဆောင်နိုင်သောကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်။ဤဒြပ်ပေါင်း၏ monoisotopic အရည်အသွေးသည် BDDE နှင့် ကွဲပြားသောကြောင့် ထိခိုက်မည်မဟုတ်ပါ။LC-MS သည် 203.30/129.10 Da ၏ အစုလိုက်အပြုံလိုက် ပြောင်းလဲမှုကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။
နောက်ဆုံးတွင်၊ ဤစမ်းသပ်ချက်များသည် peak အသစ်များ၏မျိုးဆက်သည် BDDE၊ NAOH နှင့် autoclaving လုပ်ငန်းစဉ်ပေါ်တွင်မူတည်သည်၊ သို့သော် HA နှင့်ဘာမှမဆိုင်ကြောင်းပြသသည်။
ခန့်မှန်းခြေ 2.71 မိနစ်တွင် သိမ်းဆည်းထားသည့်အချိန်၌ တွေ့ရှိခဲ့သော အမြင့်ဆုံးအထွတ်အထိပ်အသစ်ကို LC-MS ဖြင့် သတ်မှတ်သည်။ဤရည်ရွယ်ချက်အတွက်၊ BDDE (9.9 mg/mL) ကို 1% NaOH aqueous solution နှင့် autoclaved လုပ်ထားသည်။ဇယား 4 တွင်၊ အထွတ်အထိပ်အသစ်၏ဝိသေသလက္ခဏာများကိုသိရှိထားသော BDDE ရည်ညွှန်းသည့်အထွတ်အထိပ် (ထိန်းသိမ်းချိန်ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 3.47 မိနစ်) နှင့် နှိုင်းယှဉ်ထားသည်။တောင်ထိပ်နှစ်ခု၏ အိုင်းယွန်းကွဲကွဲမှု ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအပေါ် အခြေခံ၍ သိုလှောင်ချိန် 2.72 မိနစ်ရှိသော အထွတ်အထိပ်သည် BDDE peak နှင့် တူညီသော အပိုင်းအစများကို ပြသသော်လည်း ပြင်းထန်မှု ကွဲပြားသည် (ပုံ 6) ဟု ကောက်ချက်ချနိုင်သည်။2.72 မိနစ်၏ ထိန်းသိမ်းထားချိန် (PIS) နှင့် သက်ဆိုင်သော အထွတ်အထိပ်အတွက် 147 Da ၏ ဒြပ်ထုခွဲမှုပြီးနောက် ပိုမိုပြင်းထန်သော အထွတ်အထိပ်ကို တွေ့ရှိရသည်။ဤဆုံးဖြတ်မှုတွင်အသုံးပြုသည့် BDDE အာရုံစူးစိုက်မှု (9.9 mg/mL) တွင်၊ ကွဲပြားသောစုပ်ယူမှုမုဒ်များ (UV၊ λ=200 nm) ကို ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်ခွဲထုတ်ပြီးနောက် (ပုံ 7) ကိုလည်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။သိုလှောင်ချိန် 2.71 မိနစ်ရှိသော အထွတ်အထိပ်ကို 200 nm တွင် မြင်နိုင်သော်လည်း BDDE အထွတ်အထိပ်ကို တူညီသောအခြေအနေများအောက်တွင် chromatogram တွင် စောင့်ကြည့်မရနိုင်ပါ။
ဇယား 4 သည် 2.71 မိနစ်ခန့် ထိန်းထားနိုင်သည့် အချိန်နှင့် BDDE အထွတ်အထိပ်၏ လက္ခဏာရပ်ရလဒ်များ 3.47 မိနစ်
မှတ်ချက်- ဤရလဒ်များရရှိရန်၊ LC-MS နှင့် HPLC ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု (MRM နှင့် PIS) သည် အထွတ်အထိပ်နှစ်ခုတွင် လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။HPLC ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက်၊ လှိုင်းအလျား 200 nm ရှိသော UV detection ကို အသုံးပြုသည်။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC၊ မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်အရည် chromatography;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊MRM၊ မျိုးစုံသော တုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း၊m/z၊ ထုထည်မှ အားသွင်းအချိုး၊PIS၊ ထုတ်ကုန် Ion စကင်န်ဖတ်ခြင်း;ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည်၊ ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည်။
မှတ်ချက်- ဒြပ်ထုအပိုင်းအစများကို LC-MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု (PIS) မှ ရရှိသည်။ထိပ်တန်း ခရိုမာတိုဂရမ်- BDDE စံနမူနာအပိုင်းအစများ၏ ဒြပ်ထုရောင်စဉ်။အောက်ခြေ ခရိုမာတိုဂရမ်- တွေ့ရှိရသော အထွတ်အထိပ်အသစ်၏ ထုထည်ပမာဏ (BDDE အထွတ်အထိပ်နှင့် ဆက်စပ်နေသော RRT သည် 0.79)။BDDE ကို 1% NaOH ဖြေရှင်းချက်နှင့် autoclaved ပြုလုပ်ထားသည်။
အတိုကောက်များ- BDDE၊ 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS၊ အရည် chromatography နှင့် mass spectrometry၊MRM၊ မျိုးစုံသော တုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခြင်း၊PIS၊ ထုတ်ကုန်အိုင်းယွန်းစကင်န်;RRT၊ ဆွေမျိုးထိန်းသိမ်းချိန်။
203.30 Da ရှေ့ပြေးအိုင်းယွန်း၏ ပုံ 7 အိုင်းယွန်း နှင့် (A) သည် 2.71 မိနစ်ဖြင့် ထိန်းသိမ်းထားချိန်နှင့် (B) BDDE ရည်ညွှန်းစံနှုန်း အမြင့်ဆုံး 3.46 မိနစ်တွင် 200 nm တွင် BDDE ၏ ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည် ထောက်လှမ်းမှု။
ချိတ်ဆက်ထားသော HA ဟိုက်ဒရိုဂျယ်များအားလုံးတွင် LC-MS ပမာဏကို တိုင်းတာပြီးနောက် ကျန်ရှိသော BDDE အာရုံစူးစိုက်မှုသည် <2 ppm ဖြစ်သည်၊ သို့သော် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် အမည်မသိအထွတ်အထိပ်အသစ်တစ်ခု ပေါ်လာသည်ကို သတိပြုမိသည်။ဤအထွတ်အထိပ်အသစ်သည် BDDE စံထုတ်ကုန်နှင့် မကိုက်ညီပါ။BDDE စံထုတ်ကုန်သည် အပြုသဘောဆောင်သော MRM မုဒ်တွင် တူညီသော အရည်အသွေးပြောင်းလဲခြင်း (MRM ပြောင်းလဲခြင်း 203.30/129.10 Da) ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကိုလည်း ဆောင်ရွက်ပေးခဲ့သည်။ယေဘုယျအားဖြင့်၊ chromatography ကဲ့သို့သော အခြားသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနည်းများကို ဟိုက်ဒရိုဂျယ်များတွင် BDDE ကိုသိရှိရန် ကန့်သတ်စစ်ဆေးမှုများအဖြစ် အသုံးပြုသော်လည်း အများဆုံးသိရှိနိုင်မှုကန့်သတ်ချက် (LOD) သည် 2 ppm ထက် အနည်းငယ်နိမ့်သည်။အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ ယခုအချိန်အထိ၊ NMR နှင့် MS ကို အပြန်အလှန်ချိတ်ဆက်ထားသော HA ထုတ်ကုန်များ၏ သကြားယူနစ်အပိုင်းအစများအတွင်း HA ၏ ဆက်စပ်မှုအပိုင်းအစများအတွင်း HA ၏ အသွင်အပြင်ကို ခွဲခြားသတ်မှတ်ရန် အသုံးပြုထားသည်။ဤနည်းပညာများ၏ ရည်ရွယ်ချက်မှာ ဤဆောင်းပါးတွင် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ကျန်ရှိသော BDDE ထောက်လှမ်းမှုကို ပမာဏသတ်မှတ်ရန် ဘယ်သောအခါမှ မဖြစ်ခဲ့ပါ (ကျွန်ုပ်တို့၏ LC-MS နည်းလမ်း၏ LOD = 10 ppb)။
တင်ချိန်- စက်တင်ဘာ-၀၁-၂၀၂၁